Allélotypage 1823262 27538876 2008-03-18T20:15:49Z Chmlal 231806 /* Application */ détails {{ébauche|biochimie|bbcm}} L''''allélotypage''' est une technique de [[biologie moléculaire]] permettant la détermination des fréquences relatives des [[allèle]]s. ==Principe== Le principe consiste à amplifier par [[Réaction en chaîne par polymérase|PCR]] des séquences [[microsatellite]]s, dispersées sur le [[génome]] et situées entre les séquences codantes des gènes ou dans de grands [[intron]]s. Ils sont hautement polymorphes dans une population, mais très stables chez un individu donné. ==Application== Cette technique permet la classification [[phénotype|phénotypique]] de certaines [[cancer|tumeurs solides]]. Après l'amplification des microsatellites sélectionnés par [[Réaction en chaîne par polymérase|PCR]], les amplifiats sont séparés sur gel dénaturant à l'aide d'un séquenceur automatisé. Cet appareil permet, par une technique de marquage non [[radioactive]] des produits de [[Réaction en chaîne par polymérase|PCR]], de déterminer leur taille, donc le nombre de répétitions de la séquence [[microsatellite]], et de les quantifier. Un [[microsatellite]] est dit informatif si après migration, il apparaît deux pics dont chacun représente l'amplification de la séquence [[microsatellite]] portée par chaque [[allèle]] : cela signifie que le nombre de répétitions du [[microsatellite]] est différent entre les 2 allèles. Le [[microsatellite]] est dit non informatif si un seul pic est observé : cela signifie que le nombre de répétitions du [[microsatellite]] est identique entre les 2 allèles. Le rapport de la hauteur des deux pics de chaque microsatellite amplifié à partir de l’[[Acide désoxyribonucléique|ADN]] des cellules tumorales est comparé au rapport des pics obtenus à partir de cellules non tumorales du même individu. Ceci permet de calculer le pourcentage du remaniement allélique d’après la formule : Pourcentage du remaniement allélique = ((b/a) Tissu tumorale – (b/a) Tissu non tumorale) / (b/a) Tissu non tumorale <br/> a et b représentant la hauteur des deux pics de chaque séquence [[microsatellite]] amplifiée.<br/> Ce pourcentage du remaniement allélique traduit la proportion de tissu tumorale ayant une altération au [[locus]] considéré : on parle de remaniement allélique. Une variation des rapports entre tissu tumoral et tissu non tumoral supérieure à une valeur seuil calculée à partir d'une population témoin est considérée comme une altération. Cependant, cette méthode ne permet pas de distinguer une [[délétion]] d’une [[amplification]] allélique. {{portail bbcm}} [[Catégorie:Technique de biologie moléculaire]] [[Catégorie:Génétique]]