Allélotypage
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2008-03-18T20:15:49Z
Chmlal
231806
/* Application */ détails
{{ébauche|biochimie|bbcm}}
L''''allélotypage''' est une technique de [[biologie moléculaire]] permettant la détermination des fréquences relatives des [[allèle]]s.
==Principe==
Le principe consiste à amplifier par [[Réaction en chaîne par polymérase|PCR]] des séquences [[microsatellite]]s, dispersées sur le [[génome]] et situées entre les séquences codantes des gènes ou dans de grands [[intron]]s. Ils sont hautement polymorphes dans une population, mais très stables chez un individu donné.
==Application==
Cette technique permet la classification [[phénotype|phénotypique]] de certaines [[cancer|tumeurs solides]]. Après l'amplification des microsatellites sélectionnés par [[Réaction en chaîne par polymérase|PCR]], les amplifiats sont séparés sur gel dénaturant à l'aide d'un séquenceur automatisé. Cet appareil permet, par une technique de marquage non [[radioactive]] des produits de [[Réaction en chaîne par polymérase|PCR]], de déterminer leur taille, donc le nombre de répétitions de la séquence [[microsatellite]], et de les quantifier. Un [[microsatellite]] est dit informatif si après migration, il apparaît deux pics dont chacun représente l'amplification de la séquence [[microsatellite]] portée par chaque [[allèle]] : cela signifie que le nombre de répétitions du [[microsatellite]] est différent entre les 2 allèles. Le [[microsatellite]] est dit non informatif si un seul pic est observé : cela signifie que le nombre de répétitions du [[microsatellite]] est identique entre les 2 allèles. Le rapport de la hauteur des deux pics de chaque microsatellite amplifié à partir de l’[[Acide désoxyribonucléique|ADN]] des cellules tumorales est comparé au rapport des pics obtenus à partir de cellules non tumorales du même individu. Ceci permet de calculer le pourcentage du remaniement allélique d’après la formule :
Pourcentage du remaniement allélique = ((b/a) Tissu tumorale – (b/a) Tissu non tumorale) / (b/a) Tissu non tumorale <br/>
a et b représentant la hauteur des deux pics de chaque séquence [[microsatellite]] amplifiée.<br/>
Ce pourcentage du remaniement allélique traduit la proportion de tissu tumorale ayant une altération au [[locus]] considéré : on parle de remaniement allélique. Une variation des rapports entre tissu tumoral et tissu non tumoral supérieure à une valeur seuil calculée à partir d'une population témoin est considérée comme une altération. Cependant, cette méthode ne permet pas de distinguer une [[délétion]] d’une [[amplification]] allélique.
{{portail bbcm}}
[[Catégorie:Technique de biologie moléculaire]]
[[Catégorie:Génétique]]