Dosage du glucose par le DNS
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2008-04-29T08:03:54Z
Okram
226801
/* Solutions */
Le '''dosage du glucose par le DNS''' est un [[dosage colorimétrique]] du [[glucose]].
===Principe===
On utilise les propriétés réductrices du [[glucose]]. À chaud et en milieu [[alcalin]], il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique : DNS (acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur.
* Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque (3-amino-5-nitrosalicylique) :
[[Image:Réduction dns.png|center|550px]]
* Le glucose, quant à lui est oxydé en divers produits d'oxydation :
<math>Glc \longrightarrow produits \, d'oxydation + ne^{-}</math>
L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composé rouge. Cette réaction n'est pas [[stœchiométrie|stœchiométrique]] : il n'y a pas de bilan d'oxydoréduction. L'intensité de la coloration rouge est proportionnelle à la concentration de l'[[ose]] si l'on opère dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'étalonnage ne passent pas toujours par l'origine.
Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs.
===Protocole===
====matériel====
*[[Spectrophotomètre]] ;
*Tubes à essais lavés et secs ;
*[[Pipette automatique]] ;
*[[Becher]]s ;
*Cuves à spectrophotomètre.
====Solutions====
*DNS;
*Solution de glucose à 0.005 mol/L ;
*Eau distillée ;
*Solution à doser.
====Etapes====
=====Préparation de la gamme d'étalonnage=====
Dans une série de tubes :
**introduire 0-0,2-0,4-0,6-0,9-1,2 mL de solution de glucose à 0.005 mol/L
**Ajuster chaque tube à 2,5 mL avec de l'eau distillée
**Ajouter 1mL de réactif 3-5 DNS
Mélanger et boucher les tubes avec du coton cardé et du papier aluminium.
Porter au [[bain marie]] à 100°C pendant 5 minutes exactement.
Refroidir et ajouter 7,5 mL (Qsp 10ml) d'eau distillée dans chaque tube, homogénéiser et laisser reposer pendant 15 minutes.
Lires les absorbances à 540 nm contre le témoin.
=====Essais=====
'''''Ils sont à traiter dans les mêmes conditions opératoires.'''''<br/>
Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 ml diluées convenablement additionnées d'1ml d'eau distilée et d'1ml de DNS.
{| align="center" border="1"
|+ Tableau colorimétrique ( résultats expérimentaux )
|-
! align="center" |Tubes
| align="center" |'''0'''
| align="center" |'''1'''
| align="center" |'''2'''
| align="center" |'''3'''
| align="center" |'''4'''
| align="center" |'''5'''
|-
! bgcolor="#C0E0F0" align="center" |Solution de glucose à 0,005 mol/L en mL
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,2
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,4
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,6
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,9
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1,2
|-
! align="center" |Eau en mL
| align="center" |1,5
| align="center" |1,3
| align="center" |1,1
| align="center" |0,9
| align="center" |0,6
| align="center" |0,3
|-
! bgcolor="#C0E0F0" align="center" |DNS en mL
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1
| bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1
|-
! align="center" |Quantité de glucose en M
| align="center" |0
| align="center" |0,002
| align="center" |0,004
| align="center" |0,006
| align="center" |0,009
| align="center" |0,012
|-
|}
Ce tableau représente ce qui doit être mis dans chaque tube et en quelle quantité.
[[Catégorie:Technique de laboratoire]]