Dosage du glucose par le DNS 549568 29085650 2008-04-29T08:03:54Z Okram 226801 /* Solutions */ Le '''dosage du glucose par le DNS''' est un [[dosage colorimétrique]] du [[glucose]]. ===Principe=== On utilise les propriétés réductrices du [[glucose]]. À chaud et en milieu [[alcalin]], il y a réduction de l'acide 3,5-dinitrosalycilique : DNS (acide 2-hydroxy-3,5-dinitrobenzoïque) qui joue le rôle d'oxydant, le glucose étant le réducteur. * Réaction de réduction de l'acide 3,5-dinitrosalicylique en acide 3-amino-2-hydroxy-5-nitrobenzoïque (3-amino-5-nitrosalicylique) : [[Image:Réduction dns.png|center|550px]] * Le glucose, quant à lui est oxydé en divers produits d'oxydation : <math>Glc \longrightarrow produits \, d'oxydation + ne^{-}</math> L'acide 3-amino-5-nitrosalicylique est un composé rouge. Cette réaction n'est pas [[stœchiométrie|stœchiométrique]] : il n'y a pas de bilan d'oxydoréduction. L'intensité de la coloration rouge est proportionnelle à la concentration de l'[[ose]] si l'on opère dans des conditions physico-chimiques constantes. Les droites d'étalonnage ne passent pas toujours par l'origine. Cette méthode n'est pas applicable au dosage d'un mélange complexe de glucides réducteurs. ===Protocole=== ====matériel==== *[[Spectrophotomètre]] ; *Tubes à essais lavés et secs ; *[[Pipette automatique]] ; *[[Becher]]s ; *Cuves à spectrophotomètre. ====Solutions==== *DNS; *Solution de glucose à 0.005 mol/L ; *Eau distillée ; *Solution à doser. ====Etapes==== =====Préparation de la gamme d'étalonnage===== Dans une série de tubes : **introduire 0-0,2-0,4-0,6-0,9-1,2 mL de solution de glucose à 0.005 mol/L **Ajuster chaque tube à 2,5 mL avec de l'eau distillée **Ajouter 1mL de réactif 3-5 DNS Mélanger et boucher les tubes avec du coton cardé et du papier aluminium. Porter au [[bain marie]] à 100°C pendant 5 minutes exactement. Refroidir et ajouter 7,5 mL (Qsp 10ml) d'eau distillée dans chaque tube, homogénéiser et laisser reposer pendant 15 minutes. Lires les absorbances à 540 nm contre le témoin. =====Essais===== '''''Ils sont à traiter dans les mêmes conditions opératoires.'''''<br/> Réaliser le dosage avec des prises d'essais de 0,5 ml diluées convenablement additionnées d'1ml d'eau distilée et d'1ml de DNS. {| align="center" border="1" |+ Tableau colorimétrique ( résultats expérimentaux ) |- ! align="center" |Tubes | align="center" |'''0''' | align="center" |'''1''' | align="center" |'''2''' | align="center" |'''3''' | align="center" |'''4''' | align="center" |'''5''' |- ! bgcolor="#C0E0F0" align="center" |Solution de glucose à 0,005 mol/L en mL | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,2 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,4 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,6 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |0,9 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1,2 |- ! align="center" |Eau en mL | align="center" |1,5 | align="center" |1,3 | align="center" |1,1 | align="center" |0,9 | align="center" |0,6 | align="center" |0,3 |- ! bgcolor="#C0E0F0" align="center" |DNS en mL | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1 | bgcolor="#C0E0F0" align="center" |1 |- ! align="center" |Quantité de glucose en M | align="center" |0 | align="center" |0,002 | align="center" |0,004 | align="center" |0,006 | align="center" |0,009 | align="center" |0,012 |- |} Ce tableau représente ce qui doit être mis dans chaque tube et en quelle quantité. [[Catégorie:Technique de laboratoire]]