Gram négatif
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2008-06-12T12:58:56Z
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Les [[bactérie]]s à '''Gram négatif''' sont mises en évidence par une technique de coloration appelée [[coloration de Gram]]. Les bactéries à Gram négatif apparaissent alors roses au [[microscope]]. La technique de coloration repose sur les caractéristiques [[membrane (biologie)|membranaire]]s et de [[paroi bactérienne|paroi]] de la bactérie. La [[coloration de Gram]] est un facteur déterminant dans la [[taxonomie]] (classification) bactérienne.[[Image:Escherichia coli Gram.jpg|Rigth|thumb|Des bactéries Gram - (Escherichia coli)]]
== Principe de coloration des Gram négatif ==
Après fixation des [[bactérie]]s sur une lame (deux méthodes possibles : fixation à l'[[éthanol]] à 90° (5 minutes) ou par passage de la lame dans la flamme, dite ''frottis'') :
* La lame est plongée dans un premier colorant : le ''violet de gentiane'' (1 minute). Le violet de gentiane est un colorant puissant, ([[toxique]] et [[cancérigène]]). Il va traverser les [[paroi bactérienne|paroi]]s et [[membrane (biologie)|membrane]]s des bactéries et se fixer dans leurs [[cytoplasme]]s. Ainsi à cette étape toutes les [[Cellule (biologie)|cellules]] sont colorées en violet.
* La lame est ensuite traitée au [[lugol]] (diiode) en solution qui sert de ''mordant'' (30 secondes) : il va ''renforcer'' le violet de gentiane contenu dans le [[cytoplasme]] des bactéries.
* On chasse ensuite le violet avec une solution d'[[éthanol]] à 90°. Cette étape est cruciale car permet de discriminer les bactéries''Gram négatif'' des bactéries [[Gram positif]]. Le principe est le suivant : les bactéries ''Gram négatif'' possèdent une paroi pauvre en [[peptidoglycane]], composant qui en raison de sa faible quantité va permettre a l'alcool d' emporter le violet de gentiane, celui-ci disparaissant du cytoplasme. La bactérie est donc décolorée (pour plus d'information, voir les ''caractéristiques des bactéries Gram négatif'').
* La lame, après avoir été rincée, est plongée brièvement dans un deuxième colorant, la ''fuchsine'' (1 minutes). Ce colorant traverse toutes les parois et membranes et va colorer en rose toutes les bactéries qui ont été décolorées durant l'étape précédente ; les bactéries [[Gram positif]] étant colorées en violet (plus sombre) n'apparaîtront pas rose (plus clair).
La lame est ensuite récupérée, rincée et séchée, puis observée au [[microscope]] optique généralement à l'objectif x100 + huile à immersion. Les bactéries ''Gram négatif'' apparaîtront en rose. L'observation de leur couleur est généralement accompagnée de descriptions structurelles (ex. [[bacille (forme)|bacille]] ou [[Coque (forme)|coque]]).On pourra également étudier la mobilité des bactéries(mouvement aléatoire=bactérie péritriche ; mouvement "droit"=bactérie monotriche).
== Caractéristiques des bactéries Gram négatif ==
===Description de l'enveloppe===
Les bactéries ''Gram négatif'' ont une structure qui s'organise en trois grandes parties : (de l'extérieur vers l'intérieur)
* La membrane externe = la paroi
* L'espace périplasmique et [[peptidoglycane]]
* La membrane plasmique
La membrane externe est en contact direct avec le milieu extérieur. Elle est principalement composée de [[phospholipide]]s organisés en bicouche (partie [[hydrophile]] à l'extérieur et partie [[lipophile]] à l'intérieur) mais contient aussi de nombreuses [[protéine intrinsèque|protéines intrinsèques]], notamment les protéines de transports appelées [[porine]]s. Beaucoup de Gram négatif (ex. ''Salmonella'') possèdent aussi un composé non protidique appelé [[lipopolysaccharide]] ou LPS ; ce composé peu [[immunogène]], dont le pouvoir [[pathogène]] (lipide A) est inclus dans la membrane externe, s'active lors de la [[lyse (biologie)|lyse]] de la bactérie.
La membrane externe est reliée au [[peptidoglycane]] par la [[lipoprotéine de Braun]].
L'espace périplasmique est un espace de stockage d'[[enzyme]]s, de [[nutriment]]s... Il a beaucoup d'autres fonctions, notamment dans certaines étapes de la [[synthèse de protéines]] et dans le [[métabolisme]]. Il se situe entre la membrane externe et la membrane plasmique et il contient une couche de [[peptidoglycane]]s.
La couche de peptidoglycane (appelé aussi muréine) est relativement mince chez les ''Gram négatif'' contrairement aux [[Gram positif]].
La membrane plasmique est semblable à la membrane externe (excepté le LPS). Elle possède des protéines poreuses aboutissant dans l'espace périplasmique ([[synthèse]] de protéine). La membrane plasmique contient de nombreux autres complexes protéiques d'une importance vitale pour la bactérie (comme l'[[Adénosine triphosphate|ATP]] ''synthase'') qui ont des rôles prépondérants dans le métabolisme bactérien.
== Exemples de bactéries Gram négatif ==
*Famille des ''[[Enterobacteriaceae]]'' :
** Genre ''[[Salmonella]]''
** Espèce ''[[Escherichia coli]]''
** Espèce ''[[Yersinia pestis]]'' (responsable de la [[peste]])
*Famille des ''[[Vibrionaceae]]'' :
** Espèce ''[[Vibrio cholerae]]'' (responsable du [[choléra]])
*Famille des ''[[Pseudomonadaceae]]'' :
** Genre ''[[Pseudomonas]]''
*Famille de ''[[Neisseriaceae]]''
**Espèce ''[[Neisseria meningitidis]]'' (responsable de la [[méningite]] bactérienne)
== Voir aussi ==
* [[Gram positif]].
* Les [[mycobactérie]]s : une exception car non colorable par la méthode de Gram car acido-alcoolo-résistantes.
::Voir [[coloration de Ziehl-Neelsen]].
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