Hybridation in situ
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2008-02-17T09:49:36Z
June Lemon
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{{Voir homonymes|Hybridation|In situ}}
L''''Hybridation In Situ''' (HIS) est une technique de laboratoire pour localiser une séquence de nucléotides connue mono-brin ([[Acide ribonucléique|ARN]] ou [[Acide désoxyribonucléique|ADN]]) sur une [[coupe histologique]] de tissu.
Cette technique repose sur la complémentarité des [[bases azotées]] entre elles (en effet, si l'on place dans un même milieu deux mono-brins complémentaires, ils vont naturellement se rapprocher pour former une hélice).
Ainsi, pour pouvoir localiser une molécule d'ADN ou ARN, on doit:
# la dénaturer en la chauffant (la séquence double brin (en hélice) devient mono-brin)
# choisir une sonde complémentaire de la séquence cible
# marquer la sonde (pour qu'on puisse la repérer et la visualiser).
=Marquage de la sonde=
On peut marquer la sonde grâce à :
*des isotopes radioactifs comme le [[tritium]] H³, P<sup>32</sup> ou S<sup>35</sup> qu'on peut révéler par [[autoradiographie]]
*des produits fluorescents (on parle alors d'[[hybridation fluorescente in situ]] (FISH)), qu'on révèle grâce à la [[microscopie à fluorescence]]
*des [[haptène]]s, [[Vitamine B8|biotine]] ou dioxygénine, qu'on peut révéler avec de l'avidine ou de la streptavidine, ou encore avec des [[anticorps]] marqués par une [[enzyme]]
*des [[enzyme]]s, qu'on révèle à l'aide d'[[anticorps]].
L'HIS est également réalisable en microscopie électronique en utilisant un marquage à l'or colloïdal avec plusieurs tailles de grains possibles (0.8 à 20 nm).
==Article connexe==
* [[Hybridation fluorescente in situ]]
[[Catégorie:Technique de laboratoire]]
[[de:In-situ-Hybridisierung]]
[[en:In situ hybridization]]
[[he:היברידיזציה In situ]]
[[ja:In situ ハイブリダイゼーション]]
[[lt:Chromosomų dažymas]]
[[sv:In situ-hybridisering]]
[[zh:熒光原位雜交]]