Kligler-Hajna
608701
27312622
2008-03-12T20:13:07Z
83.154.136.140
/* Production de gaz */
Le milieu de [[Kligler-Hajna]] est un milieu permettant la recherche simultanée de :
* L'utilisation du [[lactose]] ;
* La fermentation du [[glucose]] ;
* La production d'[[sulfure d'hydrogène|H<sub>2</sub>S]] ;
* La production de [[gaz]] ;
* La [[lysine décarboxylase]].
* La [[B-galactosidase]] pour les bactéries [[lactose]] - (test [[ONPG]]).
===Composition===
- [[Peptone]] ......................... 15 g
- [[Extrait de viande]] ............... 3 g
- [[Extrait de levure]] ............... 3 g
- [[Peptone]] pepsique de viande ...... 5 g
- [[Glucose]] ......................... 1 g
- [[Lactose]] ......................... 10 g
- [[Rouge de phénol]] ................. 25 mg
- [[Chlorure de sodium]] .............. 5 g
- Sulfate ferreux.............. 0,2 g
- [[Thiosulfate de sodium]] ........... 0,3 g
- [[Agar-agar]] ....................... 11 g
[[potentiel hydrogène|pH]] = 7,5
Les peptones sont riches en [[lysine]]. Le milieu est conditionné en tubes avec une pente et un culot.
===Ensemencement===
* La pente doit être abondamment ensemencée (stries serrées).
* Le culot est ensemencé simple piqûre.
Incubation : 37 °C pendant 18 à 24 h (ne pas dépasser ce délai) après avoir dévisser le bouchon partiellement ce qui permet les échanges gazeux.
===Lecture, interprétation===
====Utilisation des glucides====
[[Image:Dégradation lactose.png|left|350px]]
Pour pouvoir utiliser le [[lactose]], une bactérie doit posséder deux [[enzyme]]s (schéma ci-contre) :
* Une β-galactoside [[perméase]] (1) ;
* Une [[β-galactosidase]] (2) .
Il s'en suit une série de réactions de dégradation du glucose (3) conduisant à la production d'énergie E.
Le glucose '''inhibe''' la synthèse de ces deux enzymes. C'est ce que l'on appelle l'effet [[glucose]]. En effet, l'utilisation des glucides suit la loi de [[diauxie]], l'utilisation du [[lactose]] n'aura lieu qu'après épuisement du glucose. Or, le glucose est en faible quantité par rapport au lactose et la pente est ensemencée abondamment.
La pente et le culot doivent être interprétés indépendamment.
[[Image:Kligler résultats.png|frame|'''Figure 1''' : Résultats de l'incubation du milieu de Kligler-Hajna.]]
=====Interprétation de la pente=====
* Dans un premier temps, les bactéries utilisent le [[glucose]] comme source de carbone et d'énergie (à cause de l'effet glucose). Cette utilisation s'accompagne de la production d'acides organiques d'où le virage du rouge au jaune du milieu (figure 1A).
* Dans un second temps, du fait du développement rapide (en aérobiose) et de la faible concentration en glucose en moins de 24 heures, la totalité du glucose est dégradé, il y a '''disparition''' de l'effet glucose. Puis, deux possibilités :
** Si la bactérie est β-galactoside perméase + '''ET''' β-galactosidase + : les bactéries utilisent le lactose avec production d'acides organiques : le virage au jaune est confirmé (figure 1B).
** Si la bactérie est β-galactoside perméase + et β-galactosidase - '''OU''' β-galactoside perméase - et β-galactosidase - : les bactéries ne peuvent pas utiliser le lactose. Les bactéries utilisent alors comme source de carbone et d'énergie les peptones (qui ne sont dégradables qu'en conditions aérobies) : le métabolisme protique libère des produits basique (ammoniac, amines...) d'où une recoloration au rouge de la pente (figure 1).
Ainsi :
* '''Pente rouge''' : bactérie [[lactose]] - (figure 1A);
* '''Pente jaune''' : bactérie [[lactose]] + (figure 1B).
=====Interprétation du culot=====
* Dans un premier temps, les bactéries [[fermentation|fermentent]] le glucose avec production importante d'acides organiques (à cause de l'effet glucose) (figure 1D).
* Comme sur la pente, en moins de 24 heures, tous le glucose est fermenté. Cependant, si les bactéries sont lactose -, l'utilisation des peptones avec une alcalinisation ne permet pas le revirage de l'indicateur de pH, le culot restera jaune en 24 h (figure 1D).
* Si la bactérie n'est pas capable de fermenter le glucose, il n'y a pas production d'aciedes organiques, le culot reste rouge (figure 1C).
Ainsi :
* '''Culot rouge''' : bactérie [[glucose]] - (figure 1C) ;
* '''Culot jaune''' : bactérie [[glucose]] + (figure 1D).
=====Production de gaz=====
La production de gaz lors de l'utilisation des glucides est mise en évidence par le décollement de la gélose et/ou des bulles dans la gélose.
elle est donc Gaz -
====Production de sulfure d'hydrogène====
Elle a lieu à partir de l'ion [[thiosulfate]] :
<math>
S_2O_3^{2-} + 10 H^+ + 8 e^- \longrightarrow 2 H_2S + 3 H_2O
</math>
Le sulfure d'hydrogène réagit avec les ions fer III (Fe<sup>3+</sup>) du citrate de fer pour former un précipité de sulfure de fer noir. Ainsi :
* Bactéries H<sub>2</sub>S + : précipité noir ;
* Bactéries H<sub>2</sub>S - : pas de précipité noir ;
====Présence d'une lysine décarboxylase====
La [[lysine décarboxylase]] (LDC) décarboxyle la [[lysine]] présente dans le milieu en [[cadavérine]] (amine très apolaire en milieu basique) soluble dans le [[chloroforme]]. La [[ninhydrine]] permet de mettre en évidence la [[cadavérine]].
* Verser 1 mL de [[potasse]] (1 mol/L) sur la pente du milieu de Kligler.
* Verser 1 mL de [[chloroforme]] et laisser décanter.
* Prélever la phase chloroformique (en bas) et verser dans un tube à hémolyse en verre.
* Ajouter quelques gouttes de [[ninhydrine]] (en solution chloroformique à 1 g/L) dans le tube à hémolyse.
* Incuber quelques minutes au bain-marie à 37 °C.
* Lecture :
** Bactéries [[Lysine décarboxylase|LDC]] + : coloration violette (présence de cadavérine) ;
** Bactéries [[Lysine décarboxylase|LDC]] - : la solution reste incolore.
'''Remarque''' : les acides aminés n'interfèrent pas sur la réaction car, en milieu basique, ils sont polaires donc insolubles dans un solvant apolaire comme le [[chloroforme]].
[[Catégorie:Milieu de culture]]