Méthode de Bradford
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2008-06-07T16:42:59Z
88.219.241.95
{{ébauche|biochimie}}
La '''méthode de Bradford''' est une méthode d'analyse spectroscopique utilisée pour mesurer la concentration des [[protéine]]s en solution.
== Principe ==
La méthode de Bradford est un dosage [[colorimétrie|colorimétrique]], basé sur le changement d'[[absorbance]](la mesure se fait à 600 nm), se manifestant par le changement de la couleur du [[bleu de Coomassie]] après liaison (complexation) avec les acides aminées aromatiques (tryptophane, tyrosine et phénylalanine) et les résidus hydrophobes des [[acides aminés]] présent dans la ou les protéines.
La forme [[ion|anionique]] (liée) du colorant est bleue, et possède un [[spectre d'absorption]] maximal estimé historiquement à 595 [[nanomètre|nm]]. Les formes cationiques (libres) du colorant sont rouges et vertes, absorbant à 465-470 nm. Le changement d'absorbance est proportionel à la quantité de colorant lié, indiquant donc la concentration en protéines dans l'échantillon.
Contrairement aux autres méthodes de mesure des protéines, la méthode de Bradford est moins sensible aux interférences par divers agents présents dans les échantillons de protéine. Elle est toutefois affectée par les [[détergent]]s, modifiée par le PH, et donne un résultat positif également aux polyphénols hydrosolubles de haut poids moléculaire (tanins).
== Désavantages ==
*La méthode de Bradford est linéaire sur un intervalle étroit, typiquement de 2 microg/ml à 120 microg/ml, ce qui rend nécessaire des dilutions préliminaires de l'échantillon tissulaire avant analyse.
*Les acides aminés, les [[peptide]]s et les [[protéine]]s de bas poids moléculaire (<3000 [[Unité de masse atomique|Da]]) ne sont pas détectés par cette méthode.
*Réagit positivement aux [[tanins]] en solution après broyage des tissus végétaux. Tout dosage des protéines solubles totales d'un tissu végétal par cette méthode doit être précédé par une fixation de ces tanins au moyen de [[PVPP]] par exemple.
== Autre utilisation possible ==
Dosage des tanins en solution, en tenant compte toutefois de la réaction avec les protéines en solution qui se surajoute.
== Autres méthodes ==
D'autres méthodes d'analyse et de mesure des protéines incluent
* la [[spectroscopie]] par [[ultraviolet|UV]]
* la [[réaction du biuret]]
* la [[méthode de Lowry]]
* la [[méthode par acide bicinchoninique]]
<!--* la [[Amido black protein assay]]
* [[o-phthalaldehyde protein assay]]-->
== Référence ==
* Bradford, M. M. ([[1976]]) ''A Rapid and Sensitive Method for the Quantitation of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding''. Anal. Biochem. '''72''':248-254.
* Kilkowski, W.J., G.G. Gross, 1999 ''Color reaction of hydrolyzable tannins with Bradford reagent, Coomassie brilliant blue''. Phytochemistry. '''51''': 363-366.
== Liens externes ==
* [http://www.histosoft.com/services/background/ba/baback.html Bradford Assay Background]
* [http://www.westernblotting.org/protocols%20Bradford%20Assay.htm Bradford Assay Protocol]
{{Protéine}}
{{Portail|biologie|chimie|Biochimie|Protéomique|Biologie cellulaire et moléculaire}}
[[Catégorie:Protéine]]
[[Catégorie:Méthode de la biochimie]]
[[de:Bradford-Test]]
[[en:Bradford protein assay]]
[[ru:Метод Бредфорд]]
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