Marqueur fluorescent en PCR 675270 20587985 2007-09-11T08:48:16Z MMBot 37832 Bot : Remplacement de texte automatisé (-\r\n\r\n(\r\n)+== +\r\n\r\n==) De nombreux marqueurs fluorescents sont utilisés en [[réaction en chaîne par polymérase|PCR]]. ==Historique== ''Par soucis de clarté, les dates correspondent à la première publication sur le domaine et seul les premiers auteurs sont cités, les références complètes étant dans le chapitre "bibliographie".'' *[[1880]] : Premier milieu de culture synthétique pour micro-organismes fluorescents par Hueppe F. *[[1964]] : Détection par fluorescence de l’ADN associé au BET par Lepecq JB. *[[1972]] : Première migration d’ADN sur gel d’electrophorèse pair Aaij C. *[[1986]] : Première publication publique sur la PCR par [[Kary Mullis]] (prix Nobel de chimie en 1993). *[[1989]] : Première détection de produit de PCR à l’aide du BET (et non par la radioactivité) par Xu ZD. *[[1992]] : Invention de la PCR en temps réel par Higuchi R. *[[1994]] : Dépôt de brevet du [[SYBR Green I]] par Molecular Probes. *[[1995]] : Premier emploi du SYBR green pour détecter un produit de PCR par Schneeberger C. *[[1995]] : Invention des sondes d’hydrolyses par Livak KJ. ==Les marqueurs aspécifiques== ===Les intercalants de l'ADN=== ===Les marqueurs du petit sillon=== ===Les cyanidrines asymétriques=== [[Image:PCR with SYBR green.jpg|800px]] ==Les marqueurs séquences spécifiques== ===Les sondes d'hybridation=== [[Image:PCR with hybridization probe.jpg|800px]] ===Les sondes d'hydrolyses=== La sonde est construite à l'aide d'un donneur (la [[fluorescéine]] dont la longueur d'onde d'excitation est à 530 nm) et d'un "quencheur", greffés sur un polynucléotide complémentaire de la séquence d'ADN d'intérêt. [[Image:PCR with hydrolysis probe.jpg|800px]] ===Les sondes Molecular Beacons=== [[Image:PCR with Molecular Beacons probe.jpg|800px]] ===Les sondes Scorpions=== [[Image:PCR with Scorpion probe.jpg|800px]] ==Bibliographie== ===Bibliographie francophone=== *Hueppe F. Etudes sur le lait blue. Cohn's Beiträge zur Biologie der Pflanzen. 1880;3 *Lepecq JB, Yot P, Paoletti C. Interaction entre le bromhydrate d’ethidium (BET) et les acides nucléiques (AN). Etude spectrofluorométrique. [Interaction of ethidium bromhydrate (BET) with nucleic acids (NA). Spectrofluorimetric study.] C R Hebd Seances Acad Sci. 1964;259:1786-9. *Poitras E, Houde A. La PCR en temps réel: principes et applications. Reviews in Biology and Biotechnology (Canada). 2002;2(2):2-11 *Tsé C, Capeau J. Quantification des acides nucléiques par PCR quantitative en temps réel. Ann Biol Clin (Paris). 2003;61(3):279–93 ===Bibliographie anglophone=== *Aaij C, Borst P. The gel electrophoresis of DNA. 1972. Biochim Biophys Acta. May 10;269(2):192-200. *Higuchi R, Dollinger G, Walsh PS, Griffith R. Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. 1992. Biotechnology;10:413–7. *Livak KJ, Flood JA, Marmaro J, Giusti W, Deetz K. Oligonucleotides with fluorescent dyes at opposite ends provide a quenched probe system useful for detecting PCR product and nucleic acid hybridization. 1995. PCR Methods Appl. 4:357–362. *Mullis K, Faloona F, Scharf S, Saiki R, Horn G, Erlich H. Specific enzymatic amplification of DNA in vitro: the polymerase chain reaction. Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 1986;51 Pt 1:263-73. *Schneeberger C, Speiser P, Kury F, Zeillinger R. Quantitative detection of reverse transcriptase-PCR products by means of a novel and sensitive DNA stain. 1995. PCR Methods Appl. Feb;4(4):234-8. *Xu ZD, Yu YJ, Hsie AW, Caskey CT, Rossiter B, Gibbs RA. Deletion screening at the hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase locus in Chinese hamster cells using the polymerase chain reaction. 1989. Teratog Carcinog Mutagen; 9(3):177-87. [[Catégorie:Réaction en chaîne par polymérase]] [[Catégorie:Marqueur fluorescent]]