Microscope optique 47762 31626077 2008-07-16T14:17:51Z Patho 110377 /* Le microscope confocal */ [[image:Handelsuebliches lichtmikroskop der marke bresser.jpg|thumb|200px|Un microscope optique de base]] Le '''microscope optique''' est un [[Instrument optique|instrument d'optique]] muni d'un [[Objectif optique|objectif]] et d'un [[oculaire]] qui permet de grossir l'image d'un objet de petites dimensions ([[grossissement]]) et de séparer les détails de cette image ([[pouvoir de résolution]]) afin qu'il soit observable à l'œil nu. Il est utilisé en [[biologie]], pour observer les cellules, les tissus, en [[pétrographie]] pour reconnaître les roches, en [[métallurgie]] et en [[métallographie]] pour examiner la structure d'un métal ou d'un alliage. Il ne faut pas le confondre avec la [[loupe]] binoculaire qui n'exige pas des échantillons plats de faible épaisseur, ou réfléchissants, et permet d'observer des pièces naturelles sans préparation en grossissant l'image d'un facteur peu élevé, mais en gardant une vision stéréoscopique propice à l'examen macroscopique révélateur de grains, de criques, de fissures, etc. == Histoire == Il est difficile de dire qui a inventé le microscope composé. On dit souvent que l'opticien hollandais Hans Janssen et son fils Zacharias Janssen fabriquèrent le premier microscope en 1590, mais ceci provient d'une déclaration de Zacharias Janssen lui-même au milieu du {{XVIIe siècle}}. La date annoncée est assez improbable étant donné qu'il a été montré que Zacharias Janssen est né vers 1590. Un autre favori au titre d'inventeur du microscope est [[Galileo Galilei|Galilée]]. Il a développé un ''occhiolino'', un microscope composé d'une lentille convexe et d'une autre concave en 1609. Un dessin par Francesco Stelluti de trois abeilles figure sur le sceau du pape [[Urbain VIII]] (1623-1644) et passe pour la première image de microscopie publiée<ref>[[Stephen Jay Gould]], ''The Lying stones of Marrakech'', (''les pierres truquées de Marrakech'' en français), 2000.</ref>. [[Christiaan Huygens]], un autre Hollandais, a développé à la fin du {{XVIIe siècle}} un oculaire simple à deux lentilles corrigé des aberrations chromatiques, ce qui fut un grand pas en avant dans le développement du microscope. L'oculaire de Huygens est toujours fabriqué aujourd'hui, mais souffre d'un champ assez réduit et d'autres problèmes mineurs. On attribue en général à [[Antoni van Leeuwenhoek]] (1632-1723) le fait d'avoir attiré l'attention des biologistes sur les utilisations du microscope, même si des loupes ordinaires étaient fabriquées et utilisées déjà au {{XVIe siècle}}. Les microscopes artisanaux de Van Leeuwenhoek étaient des instruments simples et de taille réduite comprenant une lentille unique mais forte. En comparaison, les systèmes à plusieurs lentilles restaient difficile à mettre au point et il fallut pas moins de 150 ans de développement des optiques avant que le microscope composé puisse livrer une qualité d'image équivalente à celle des microscopes simples de Van Leeuwenhoek. Néanmoins, et malgré de nombreuses revendications, on ne peut pas considérer Van Leeunwenhoek comme l'inventeur du microscope composé. <gallery> Image:Microscope1751.jpg|Microscope optique (1751) Image:MicroscopioCuff.JPG|Microscope de Cuff (1760) Image:Microscope Zeiss 1879.jpg|Microscope Zeiss, Jena (1879) Image:MicroscopeHochgesang.JPG|Modèle Voigt & Hochgesang" (1890) </gallery> == Première approche == === Principe du microscope optique de base === [[Image:Microscope optique simplifie principe.svg|thumb|300px|Principe d'un microscope simplifié]] Le microscope optique se base sur les [[lentille optique|lentilles]] pour obtenir une image agrandie de l'échantillon à observer. On peut faire un microscope simplifié avec deux [[Lentille optique#Lentilles convergentes et divergentes|lentilles convergentes]]. L'objet à observer est placé devant la première lentille appelée « [[objectif optique|objectif]] ». Si l'objet est au-delà de la distance focale, cela forme une image réelle inversée et de taille différente ; l'image est plus grande que l'objet si celui-ci est situé à une distance inférieure au double de la distance focale de l'objectif. La deuxième lentille est l'[[oculaire]] : elle est positionnée de sorte que l'image soit dans son plan focal. Ainsi, l'[[œil]] observe une image « à l'infini », donc en relâchant les muscles chargés de l'[[accommodation]], ce qui représente un meilleur confort visuel. Il s'agit d'un système centré dioptrique, composé en partie de [[doublet (optique)|doublets]] pour en corriger certaines des [[aberration (optique)|aberration]]s optiques. ''A contrario'' d'autres systèmes optiques qui sont définis par leur [[grossissement optique]] ([[télescope]]) ou leur [[grandissement (optique)|grandissement]] ([[appareil photographique]]), le terme approprié, pour le microscope, est sa '''puissance''', rapport de l'angle, sous lequel est vu l'objet à travers l'instrument, à la longueur de cet objet. La technique d'illumination la plus utilisée en microscopie à champ large classique est l'[[illumination de Köhler]], qui garantie une qualité d'image optimale. === Constitution du microscope === [[Image:Microscope (schéma commenté).png|thumb|right|300px|microscope optique]] De bas en haut : * [[miroir]] : sert à réfléchir la lumière ambiante pour éclairer l'échantillon par en dessous, dans le cas d'un échantillon transparent (par exemple une lame mince en biologie ou en géologie, ou un liquide) ; * [[source de lumière]] artificielle de meilleure température de couleur et de stabilité et par l'usage d'un [[condenseur optique|condenseur]] qui permet à cette lumière de remplir d'une façon homogène et régulière le champ observé, et surtout de ne pas faire voir, par son réglage adéquat, les détails mécaniques de la source de lumière (spires du filament de l'ampoule). La source d'éclairage peut être plus élaborée et comporter un boîtier indépendant, éventuellement en lumière polarisée ou ultraviolet, pour faire ressortir certaines propriétés chimiques de la matière, ou éclairer l'échantillon par-dessus (notamment en métallurgie) * [[diaphragme (photographie)|diaphragme]] : ouverture de diamètre variable permettant de restreindre la quantité de lumière qui éclaire l'échantillon ; * [[platine porte-échantillon]] : où l'on pose l'échantillon ; les pinces servent à tenir l'échantillon lorsque celui-ci est mince (par exemple une lame de verre). La platine peut être mobile (gauche-droite et avant-arrière), ce qui permet de balayer l'échantillon et de sélectionner la partie observée ; * [[Objectif_optique|objectif]]s : lentille ou ensemble de lentilles réalisant le grossissement. Il y a en général plusieurs objectifs, correspondant à plusieurs grossissements, montés sur un barillet. Certains objectifs sont dits à immersion car leur puissance ne peut être atteinte qu'en éliminant la lame d'air entre l'échantillon couvert par la lamelle et la frontale de l'objectif. On utilise pour cela de l'huile de cèdre ou des huiles de synthèse dont l'indice de réfraction est proche de celui du verre. * mise au point grossière et fine ; pour que l'image soit nette, il faut que l'objet soit dans le plan focal de l'objectif ; ces molettes font monter et descendre l'ensemble objectif-oculaire avec un système de crémaillère, afin d'amener le plan focal sur la zone de l'échantillon à observer ; * [[oculaire]] : lentille ou ensemble de lentilles formant l'image d'une manière reposante pour l'œil ; les rayons arrivent parallèles, comme s'ils venaient de très loin, ce qui permet un relâchement des muscles contrôlant le cristallin ; deux oculaires placés sur une tête dite binoculaire rend plus confortable l'observation (même si elle n'apporte pas de vision stéréoscopique). L'oculaire peut être remplacé par un appareil photographique, par une caméra vidéo ou une caméra [[Charge-Coupled Device|CCD]] pour faire une acquisition numérique. Ceci permet de faire l'observation sur un moniteur (écran de type télévision) et de faciliter l'utilisation et le traitement des images (impression, traitement informatique). === Limites du microscope optique === La résolution d'un microscope désigne sa capacité à séparer des détails très voisins. Indépendamment du capteur utilisé et des aberrations ou imperfections des lentilles, la résolution du microscope optique est fondamentalement limitée par la [[diffraction]] de la lumière. En effet, du fait de la diffraction, l'image d'un point n'est pas un point, mais une tache (la [[tache d'Airy]]). Ainsi, deux points distincts mais voisins auront pour images deux taches dont le recouvrement peut empêcher de distinguer les deux points images : les détails ne sont alors plus résolus. Selon la théorie d'[[Ernst Abbe|Abbe]], la limite de résolution (transverse) <math>d</math> d'un microscope, c'est-à-dire la plus petite distance en-dessous de laquelle deux points voisins ne seront plus distingués, peut être exprimée simplement à l'aide de la longueur d'onde d'illumination <math>\lambda</math>, de l'indice de réfraction <math>n</math> en sortie d'objectif, et du demi angle du cône de lumière maximum accessible <math>\alpha</math>. :<math>d=\frac{\lambda}{2\,n\,\sin\alpha}=\frac{\lambda}{2\,\textrm{NA}}</math> où NA désigne le produit <math>n \sin\alpha</math> ou ''ouverture numérique'' de l'objectif. On peut donc augmenter la résolution de deux manières : * En augmentant l'indice de réfraction. Ceci peut être réalisé en utilisant un objectif à immersion : on immerge la frontale de l'objectif dans un liquide dont l'indice de réfraction est proche du maximum de 1,5 - celui du verre. * En diminuant la longueur d'onde. Toutefois, si on reste dans la lumière visible, il n'est pas possible de descendre en-dessous de 400 nm. La limite de résolution d'un microscope photonique classique est d'environ 0,2 μm. Le [[microscope électronique en transmission]] atteindra, lui, une limite 100 fois plus petite. Des techniques de microscopie photonique permettent de dépasser la limite d'Abbe. Elles sont parfois dites "super résolution". Citons entre autres : *les techniques d'[[illumination structurée]] et les techniques tomographiques qui cherchent à récupérer les hautes [[fréquence spatiale|fréquences spatiales]] coupées dans un microscope classique. *les techniques utilisant les ondes [[évanescentes]] ([[Microscope_optique_en_champ_proche|SNOM]]). *la [[microscopie confocale]] qui réduit la réponse impulsionnelle. == Utilisations et perfectionnement du microscope optique == === Microscopie en réflexion === Quand on utilise un microscope classique, on l'utilise en transmission, c'est à dire que la lumière traverse l'échantillon observé. Il est également possible de travailler « en réflexion ». Dans ce cas, l'échantillon est illuminé du même côté que l'observateur, soit par le dessus pour un microscope droit et par le dessous dans le cas des microscopes inversés utilisés en métallographie ou en cristallographie. La lumière produite par la source passe une première fois par l'objectif, arrive sur l'échantillon, est réfléchie et repasse par l'objectif pour observation ce qui nécessite plusieurs jeux de miroirs ou prismes. La microscopie en réflexion permet d'examiner des objets opaques, ou trop épais pour la transmission. En contrepartie bien entendu, elle ne peut donner que des informations sur la surface de l'échantillon dans le cas de l'observation en lumière blanche ; en lumière polarisée, elle permet de révéler les orientations de grains des constituants des minéraux ou métaux Un cas classique est la [[métallographie]] où l'on réalise des observations de pièces de métal appelées [[Micrographie_(contrôle)|micrographies]] de cette manière. Comme dit plus haut le microscope est souvent inversé, la pièce à observer placée posée sur la plaque support (en général percée d'un trou circulaire). === Microscopie en champ clair === La microscopie optique en champ clair est la plus simple des techniques de microscopie. L'illumination se fait par transmission de lumière blanche, c'est à dire que l'échantillon est illuminé par dessous et observé par dessus. Les limitations de cette technique sont principalement un faible contraste de la plupart des échantillons biologiques et une résolution faible due au flou créé par la matière hors du plan focal. En contrepartie, la technique est simple et l'échantillon ne nécessite qu'une préparation minime. === Microscopie en champ sombre === La microscopie en champ sombre est une technique qui permet d'améliorer le contraste d'échantillons transparents mais non teintés <ref>{{Lien web | auteur = Abramowitz M, Davidson MW | titre = Darkfield Illumination | année = 2007 | url = http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/darkfield.html | consulté le = 2007-08-22}}</ref>. L'illumination de champ sombre utilise une source de lumière alignée avec soin afin de minimiser la quantité de lumière directement transmise et de ne collecter que la lumière diffusée par l'échantillon. La microscopie en champ sombre permet d'augmenter considérablement le contraste, particulièrement pour les échantillons transparents, tout en ne nécessitant que peu d'équipement et une préparation d'échantillon simple. Toutefois, cette technique souffre d'une faible intensité lumineuse collectée et est toujours affectée par la limite de résolution. L'''illumination de Rheinberg'' est une variante de l'illumination en champ sombre dans laquelle des filtres transparents de couleur sont insérés juste avant le condenseur, de sorte que les rayons lumineux plus ou moins obliques soient colorés différemment ( le fond de l'image peut être bleu tandis que l'échantillon apparaît jaune brillant). La limite de résolution est la même que celle en champ sombre. D'autres combinaisons de couleurs sont possibles, mais leur efficacité est assez variable<ref>{{Lien web | auteur = Abramowitz M, Davidson MW | titre = Rheinberg Illumination | année = 2007 | url = http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/rheinberg.html | consulté le = 2007-08-22}}</ref>. === Illumination oblique === L'utilisation d'une illumination oblique (par le côté) donne une image d'apparence tridimensionnelle et peut mettre en valeur des aspects invisibles autrement. C'est le principal avantage. Les limitations sont les mêmes que celles de la microscopie en champ clair. === Microscopie en lumière polarisée === {{article détaillé|Microscopie en lumière polarisée}} En microscopie en lumière polarisée, on place l'échantillon entre un polariseur et un analyseur afin de détecter les variations de polarisation de la lumière après la traversée de l'échantillon. Cette technique très utile pour l'observation des milieux [[Biréfringence|biréfringents]], notamment en minéralogie. === Microscopie en fluorescence === {{Article détaillé|Microscopie à fluorescence}} Quand certains composés sont illuminés par une source de lumière de haute énergie, ils émettent alors de la lumière à une énergie plus basse. C'est le phénomène de [[fluorescence]]. La microscopie à fluorescence consiste à former une image en collectant cette lumière émise. Cette méthode est aujourd'hui de première importance dans les sciences de la vie. Elle peut être très sensible, autorisant même la détection de molécules isolées. On utilise plusieurs teintures fluorescentes afin de marquer différentes structures ou composés chimiques. Ceci permet de détecter simultanément des composés différents, tout en les différenciant par leur couleur de fluorescence. === Le microscope à contraste de phase === Le constraste de phase est une technique largement utilisée qui permet de mettre en valeur les différences d'indices de réfraction comme différence de contraste. Elle a été développée par le physicien hollandais [[Frederik Zernike]] dans les années 30 (il reçut pour cela le prix Nobel en 1953). Le noyau d'une cellule par exemple apparaîtra sombre dans le cytoplasme environnant. Le contraste est excellent, néanmoins cette technique ne peut être utilisée avec les objets épais. Bien souvent, un halo se forme autour des petits objets qui peut noyer des détails. Le système consiste en un anneau circulaire dans le condenseur qui produit un cône de lumière. Ce cône est superposé à un anneau de taille similaire dans l'objectif. Chaque objectif a un anneau de taille différente, aussi il est nécessaire d'adapter le condenseur à chaque changement d'objectif. L'anneau dans l'objectif a des propriétés optiques spéciales : il réduit l'intensité de la lumière directe et, ce qui est plus important, il crée une différence de phase artificielle d'un quart de longueur d'onde qui crée des interférences avec la lumière diffusée, et qui crée le contraste de l'image. === Le microscope confocal === {{Article détaillé|Microscope confocal}} Le microscope confocal génère une image d'une manière totalement différence de la microscopie normale en champ clair. La résolution est légèrement meilleure, mais le point le plus important est qu'il permet de former une image de coupes transversales sans être perturbée par la lumière hors du plan focal. Il donne donc une image très nette des objets en trois dimensions. Le [[microscope confocal]] est souvent utilisé en conjonction avec la [[microscopie à fluorescence]]. === Le microscope à statif inversé === {{Article détaillé|Microscope à statif inversé}} <!-- ====Fluorescence microscopy==== This method is of critical importance in the modern life sciences, as it can be extremely sensitive, allowing the detection of single molecules. Many different fluorescent [[dye]]s can be used to stain different structures or chemical compounds. One particularly powerful method is the combination of [[antibody|antibodies]] coupled to a fluorochrome as in [[immunostaining]]. Examples of commonly used fluorochromes are [[fluorescein]] or [[rhodamine]]. The antibodies can be made tailored specifically for a chemical compound. For example, one strategy often in use is the artificial production of proteins, based on the genetic code (DNA). These proteins can then be used to immunize rabbits, which then form antibodies which bind to the protein. The antibodies are then coupled chemically to a fluorochrome and then used to trace the proteins in the cells under study. Highly-efficient fluorescent [[protein]]s such as the [[green fluorescent protein]] (GFP) have been developed using the [[molecular biology]] technique of [[fusion gene|gene fusion]], a process which links the [[gene expression|expression]] of the fluorescent compound to that of the target protein.{{Lien web |auteur = Piston DW, Patterson GH, Lippincott-Schwartz J, Claxton NS, Davidson MW | année = 2007 | url=http://www.microscopyu.com/articles/livecellimaging/fpintro.html |titre=Nikon MicroscopyU: Introduction to Fluorescent Proteins |consulté le=2007-08-22 |série=Nikon MicroscopyU}} This combined fluorescent protein is generally non-toxic to the organism and rarely interferes with the function of the protein under study. Genetically modified cells or organisms directly express the fluorescently-tagged proteins, which enables the study of the function of the original protein [[in vivo]]. Since [[fluorescence|fluorescence emission]] differs in [[wavelength]] (color) from the excitation light, a fluorescent image ideally only shows the structure of interest that was labelled with the fluorescent dye. This high specificity led to the widespread use of fluorescence light microscopy in biomedical research. Different fluorescent dyes can be used to stain different biological structures, which can then be detected simultaneously, while still being specific due to the individual color of the dye. To block the excitation light from reaching the observed or the detector, [[filter (optics)|filter sets]] of high quality are needed. These typically consist of an [[excitation]] filter selecting the range of excitation [[wavelength]]s, a [[dichroism|dichroic]] mirror, and an [[Emission (electromagnetic radiation)|emission]] filter blocking the excitation light. Most fluorescence [[microscope]]s are operated in the Epi-illumination mode (illumination and detection from one side of the sample) to further decrease the amount of excitation light entering the detector. See also [[total internal reflection fluorescence microscope]]. ====Differential interference contrast microscopy==== {{main|Differential interference contrast microscopy}} Superior and much more expensive is the use of '''interference contrast'''. Differences in optical density will show up as differences in relief. A nucleus within a cell will actually show up as a globule in the most often used '''differential interference contrast''' system according to [[Georges Nomarski]]. However, it has to be kept in mind that this is an ''optical effect'', and the relief does not necessarily resemble the true shape! Contrast is very good and the condenser aperture can be used fully open, thereby reducing the depth of field and maximizing resolution. The system consists of a special prism ([[Nomarski prism]], [[Wollaston prism]]) in the condenser that splits light in an ordinary and an extraordinary beam. The spatial difference between the two beams is minimal (less than the maximum resolution of the objective). After passage through the specimen, the beams are reunited by a similar prism in the objective. In a homogeneous specimen, there is no difference between the two beams, and no contrast is being generated. However, near a refractive boundary (say a nucleus within the cytoplasm), the difference between the ordinary and the extraordinary beam will generate a relief in the image. Differential interference contrast requires a [[polarized light]] source to function; two polarizing filters have to be fitted in the light path, one below the condenser (the polarizer), and the other above the objective (the analyzer). Note: In cases where the optical design of a microscope produces an appreciable lateral separation of the two beams we have the case of [[classical interference microscopy]], which does not result in relief images, but can nevertheless be used for the quantitative determination of mass-thicknesses of microscopic objects. ====Deconvolution microscopy==== Fluorescence microscopy is extremely powerful due to its ability to show specifically labelled structures within a complex environment but also because of its inherent ability to provide three dimensional information of biological structures. Unfortunately this information is blurred by the fact, that upon illumination all fluorescently labeled structures emit light no matter if they are in focus or not. This means, that an image of a certain structure is always blurred by the contribution of light from structures which are out of focus. This phenomenon becomes apparent as a loss of contrast especially when using objectives with a high resolving power, typically oil immersion objectives with a high numerical aperture. Fortunately though, this phenomenon is not caused by random processes such as light scattering but can be relatively well defined by the optical properties of the image formation in the microscope imaging system. If one considers a small fluorescent light source (essentially a bright spot), light coming from this spot spreads out the further out of focus one is. Under ideal conditions this produces a sort of "hourglass" shape of this [[point source]] in the third (axial) dimension. This shape is called the [[point spread function]] (PSF) of the microscope imaging system. Since any fluorescence image is made up of a large number of such small fluorescent light sources the image is said to be "convolved by the point spread function". Knowing this point spread function means, that it is possible to reverse this process to a certain extent by computer based methods commonly known as [[deconvolution]] microscopy.<ref>{{cite journal |author=Wallace W, Schaefer LH, Swedlow JR |title=A workingperson's guide to deconvolution in light microscopy |journal=BioTechniques |volume=31 |issue=5 |pages=1076-8, 1080, 1082 passim |year=2001 |pmid=11730015 |doi=}}</ref> There are various algorithms available for 2D or 3D Deconvolution. They can be roughly classified in ''non restorative'' and ''restorative'' methods. While the non restorative methods can improve contrast by removing out of focus light from focal planes, only the restorative methods can actually reassign light to it proper place of origin. This can be an advantage over other types of 3D microscopy such as confocal microscopy, because light is not thrown away but reused. For 3D deconvolution one typically provides a series of images derived from different focal planes (called a Z-stack) plus the knowledge of the PSF which can be either derived experimentally or theoretically from knowing all contributing parameters of the microscope. --> == Préparation des échantillons == L'échantillon observé doit remplir certaines conditions : * de planéité, pour que l'objectif en donne une image entière nette, faute de quoi on ne peut en observer qu'une portion restreinte * en transmission, il doit être de faible épaisseur pour que la lumière le traverse et ne rende visible que quelques éléments (cellules) dans le cas de la biologie ; * en réflexion, la surface doit être en général [[polissage|polie]] afin que les rayures ne masquent pas ce que l'on veut observer ; * les parties à observer doivent pouvoir se différencier : ** différenciation de couleurs par la coloration chimique de solutions standardisées, pour la biologie ; ** attaque chimiques par des acides pour révéler des défauts en métallurgie ; ** d'autres différenciations par l'éclairage en lumière polarisée, en ultra-violet (fluorescence), ou par principe interférentiel, révélant d'autres aspect, invisibles à l'œil nu. En biologie, il est nécessaire, préalablement, de placer, la coupe de tissu ou le liquide contenant des organismes vivants, entre une lame et une lamelle de verre. L'objectif doit s'approcher de la lame pour la mise au point sans, par maladresse, détruire la préparation devenue très fragile. Du fait de la préparation, la microscopie optique nécessite une importante quantité d'appareils complémentaires pour la seule destination de l'observation microscopique. Prenons le cas de la [[biopsie]] en médecine et biologie ([[anatomopathologie]]) : le diagnostic par microscopie, de pièces biologiques prélévées par [[biopsie]] pendant une opération, impose des délais courts. Pour préparer la lame, on utilise un appareil appelé [[cryotome]], une sorte de « trancheuse à jambon », placée dans un [[cryostat]] (congélateur), qui permet de découper des tranches très fines du corps qui sera à observer en le refroidissant rapidement, puis en le découpant à l'aide de la lame d'un rasoir spécial, affûté sur une autre machine à plaque de verre à l'aide de pâtes diamantées. Si l'on veut travailler à température ambiante, les délais sont plus longs et imposent des déshydratations et remplacement des eaux supprimées par de la paraffine (24 heures) pour que l'échantillon garde sa rigidité ; ensuite, il est coloré par plusieurs substances d'actions alternées de durée très longues, elles aussi. == Notes et références == <references/> {{Traduction/Référence|en|Microscopy|177051988}} {{Traduction/Référence|en|Optical microscope|176614523}} == Voir aussi == === Articles connexes === * [[Microscopie en lumière polarisée]] * [[Microscopie à fluorescence]] * [[Microscope confocal]] * [[Microscope à contraste de phase]] * [[Stéréomicroscope]] === Liens externes === *Consortium "Optique pour l'Instrumentation", J. SURREL - H. SAUER, cours en ligne, 2008, "Microscopie Optique / Principes et utilisations de base du microscope" <http://www.optique-instrumentation.fr/> * {{fr}} [http://geweiss.club.fr/cfm/ CFM, le Club Français de Microscopie (en français)] * {{fr}} [http://www.microscopies.com/ "www.microscopies.com" site internet sur la microscopie (en français)] * {{fr}} [http://www.web-artisans.com/microscopie/ "www.microscopie.ch" site amateur (membre lenaturaliste.net) de microphotographie (en français)] * {{fr}} [http://www.cndp.fr/Themadoc/micro/Rep_hist.htm Histoire du microscope et de la microscopie] * {{fr}} [http://www.microscopie.be/ "www.microscopie.be" Société royale anversoise de micrographie (en français, anglais et allemand)] * {{en}} [http://www.microscopy.fsu.edu/ site internet de photos prises au microscope (en anglais)] * {{en}} [http://www.antique-microscopes.com Une collection de microscopes antiques (en anglais)] * {{de}} [http://www.musoptin.com/mikro1.html Une collection de microscopes antiques (en allemand)] fabriqués en France et en Allemagne 1820 - 1930 * http://www.microscopies.com/ Microscopie amateur avec Magazine en français * [http://www.ac-creteil.fr/physique/DOCGRISP/microscope/microsc1.html#a Le microscope], travaux pratiques de découverte * [http://pst.chez.tiscali.fr/fm21.htm Observer avec un microscope] * {{de}} [http://www.musoptin.com/mikro1.html Microscopes des années 1820-1940], français et allemand avec plus de 2500 photos (text en allemand) * {{en}} [http://www.antique-microscopes.com/index.html Une collection d'antiquités des microscopes] {{Équipement de laboratoire}} {{portail physique}} [[Catégorie:Microscope optique|*]] [[ca:Microscopi òptic]] [[de:Lichtmikroskop]] [[en:Optical microscope]] [[eo:Optika mikroskopo]] [[es:Microscopio óptico]] [[fa:میکروسکوپ نوری]] [[fi:Valomikroskooppi]] [[id:Mikroskop cahaya]] [[ja:光学顕微鏡]] [[ms:Mikroskop optik]] [[pl:Mikroskop optyczny]] [[ru:Оптический микроскоп]] [[simple:Light microscope]] [[uk:Оптичний мікроскоп]] [[zh:光学显微镜]]