Redistribution de fluorescence après photoblanchiment
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2008-03-31T16:06:29Z
Badmood
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==Définition==
La '''redistribution de fluorescence après photoblanchiment''' (pour ''fluorescence recovery after photobleaching'', '''FRAP''') est une méthode utilisée en [[microscope à fluorescence|microscopie à fluorescence]] pour mesurer la vitesse de [[Diffusion de la matière|diffusion]] moléculaire. Elle peut être appliquée pour étudier la mobilité moléculaire dans des [[cellule (biologie)|cellules vivantes]].
==Principe==
[[Image:FRAP_fr.jpg|right|thumb|320px|Principe de la méthode FRAP]]
Lorsque l'on a une distribution homogène d'une population moléculaire [[fluorescence|fluorescente]], on peut inhiber de manière irréversible sa fluorescence dans une zone restreinte de l'échantillon par [[photoblanchiment]] à l'aide d'un flash lumineux obtenu en exposant très brièvement cette zone avec un [[laser]]. On crée ainsi deux populations de molécules (une fluorescente l'autre pas) spatialement distinctes. Si les molécules sont capables de se déplacer dans le milieux, on assiste à une redistribution des deux populations entre la zone blanchie et le milieu adjacent jusqu'à l'homogénéisation des populations : la zone bleachée redevient progressivement fluorescente. L'analyse de la cinétique de récupération de fluorescence permet de déduire le coefficient de [[Diffusion de la matière|diffusion]] latérale « D », caractéristique de la vitesse de déplacement des molécules dans le milieu (plus la vitesse de diffusion est élevée plus la fluorescence réaugmente rapidement).
Le FLIP (Fluorescence Loss Induced by Photobleaching) est une autre manière d'étudier la mobilité moléculaire. Dans ce cas on réalise des bleaching répétitifs sur une zone ou sur un point, jusqu'à ce que la fluorescence ait entièrement disparu ou ne varie plus. Le FLIP permet de mettre en évidence des continuités dans les structures cellulaires.
Ces deux méthodes sont généralement réalisées en [[Microscope confocal à balayage laser|microscopie confocale]] ou en [[Microscopie de fluorescence par excitation multiphotonique]].
==Applications==
*Mobilité moléculaire dans les membranes ou dans la cellule.
*Proportion de molécules liées et donc immobiles.
*Echanges entre compartiments cellulaires (ex : noyau/cyoplasme).
*Echanges entre cellules (ex : par l'intermediaire de [[jonction communicante|jonctions communicantes]]).
==Remarques==
FRAP est également quelquefois traduit par "Récupération de Fluorescence Après Photoblanchiment" ou encore par "Recouvrement de Fluorescence Après Photoblanchiment".
{{Portail|chimie|physique}}
[[Catégorie:Biophysique]]
[[Catégorie:Méthode de la biochimie]]
[[Catégorie:Imagerie cellulaire]]
[[Catégorie:Histologie]]
[[Catégorie:Mesure physique]]
[[de:FRAP (Biologie)]]
[[en:Fluorescence recovery after photobleaching]]
[[nl:Fluorescence Recovery After Photobleaching]]
[[uk:Відновлення флюоресценції після фотообезбарвлення]]