Techniques de biologie moléculaire 332837 28054421 2008-04-01T12:19:56Z Badmood 4507 nouveau style de bandeau de portail, voir [[Wikipédia:Prise de décision/Bandeaux de portail]] {{ébauche|biologie cellulaire et moléculaire}} Principales techniques utilisées couramment en [[biologie moléculaire]] : ==Électrophorèse== * [[Électrophorèse sur gel]] : cette technique permet de séparer des molécules en fonction de leur taille (appelée poids moléculaire) en les faisant migrer à travers un gel par application d'un champ électrique. Le courant entraîne les molécules et les mailles du gel les freinent. Leur migration dépend donc à la fois de leur taille mais aussi de la concentration du gel; elles iront d'autant plus loin qu'elles sont de petite taille et le gel moins concentré. Cette technique peut être utilisée pour séparer de l'[[Acide désoxyribonucléique|ADN]], de l'[[Acide ribonucléique|ARN]] ([[gels d'agarose]] ou d'[[acrylamide]]) ou des protéines (gel d'acrylamide). * Électrophorèse sur gel en gradient dénaturant : [[Denaturing Gradient Gel Electrophoresis]](DGGE). * [[Électrophorèse capillaire]] : Variante d'électrophorèse utilisée pour le séquençage de l'ADN. ==Manipulation d'ADN et d'ARN== * [[Extraction d'ADN]] * Digestion enzymatique (''restriction digest'') : technique utilisant des [[enzyme de restriction|enzymes de restriction]] pour couper spécifiquement une molécule d'ADN afin de la manipuler ou de la cloner. * [[Minipréparation]] ou miniprep : technique permettant d'extraire de [[bactérie|bactéries]] transformées une petite quantité d'[[Acide désoxyribonucléique|ADN]] [[plasmide|plasmidique]]. En fonction de la quantité d'ADN souhaitée des minipréparations ou des maxipréparations sont également utilisées. * [[Clonage]] : technique qui consiste à isoler un fragment d'ADN et à le multiplier à l'identique en l'« insérant » dans une molécule d'ADN « porteuse » appelée vecteur permettant son amplification. * [[Mutagenèse dirigée]] : techniques qui permettent de modifier de façon précise et ponctuelle des bases d'un génome. ===Amplification=== * [[Réaction de polymérisation en chaine]] : Polymerase chain Reaction (PCR). Cette technique est utilisée pour amplifier de l'ADN, c’est-à-dire obtenir une grande quantité de copies d'une séquence nucléotidique donnée. *La RT-PCR peut avoir deux sens distincts : **[[PCR en temps réel]] : Real time PCR. **[[Transcription inverse]] : reverse transcriptase PCR. Cette technique est dérivée de la [[Polymerase Chain Reaction|PCR]] et permettant de cloner un [[gène]] ou de quantifier son taux de transcription (quantité d'[[Acide ribonucléique|ARN]] présente). * [[Amplification aléatoire du polymorphisme de l'ADN]] : Random amplification of polymorphic DNA (RAPD). Technique d'amplification aléatoire permettant de comparer des ADN génomiques. ===Séquençage=== * [[Séquençage de l'ADN]] : technique permettant de définir l'ordre des nucléotides d'un fragment d'ADN [[plasmide|plasmidique]] ou génomique. Les différentes méthodes de séquençage : :*Méthode chimique ou méthode de Maxam et Gilbert; :*Méthode enzymatique ou méthode de Sanger. ===Quantification=== * [[Southern_blot|Southern blotting]] : technique utilisant l'[[électrophorèse sur gel]] et permettant de détecter des séquences d'ADN particulières. Utilisée fréquemment en [[biologie moléculaire]] pour détecter le nombre de copies de [[transgène]]s insérées dans le [[génome]] d'une cellule ou d'un organisme génétiquement modifié. * [[Northern_blot|Northern blotting]] : technique dérivée du [[Southern_blot|Southern blotting]] utilisée pour détecter et quantifier un type d'ARN donné. ===Autres=== * Le [[marquage des acides nucléiques]]. * [[Transformation (génétique)|Transformation génétique]] ou [[transgénèse]] : technique consistant à introduire un ou plusieurs [[gènes]] dans des [[Cellule (biologie)|cellules]] (par exemple végétales, animales, bactériennes) menant à la transmission du [[gène]] introduit, ou [[transgène]], aux générations successives. * Le [[polymorphisme de longueur des fragments de restriction]] (ou RFLP) : technique d'étude du polymorphisme génétique, à la base des "empreintes génétiques" et du "ribotypage". * L'[[hybridation fluorescente in-situ]] (en anglais ''Fluorescent in situ hybridization'' ou FISH) ==Manipulation de protéines== * [[Western_blot|Western blotting]] : technique dérivée du [[Southern_blot|Southern blotting]] utilisée pour détecter et quantifier un type de protéine donné. *[[Séquençage des protéines]] : technique permettant de définir l'ordre des acides aminés d'une séquence polypeptidique. {{Portail|biologie|Biologie cellulaire et moléculaire|Biochimie}} [[Catégorie:Biologie moléculaire]] [[Catégorie:Réaction en chaîne par polymérase]] [[Catégorie:Technique de biologie moléculaire|*]]