Techniques de biologie moléculaire
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2008-04-01T12:19:56Z
Badmood
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{{ébauche|biologie cellulaire et moléculaire}}
Principales techniques utilisées couramment en [[biologie moléculaire]] :
==Électrophorèse==
* [[Électrophorèse sur gel]] : cette technique permet de séparer des molécules en fonction de leur taille (appelée poids moléculaire) en les faisant migrer à travers un gel par application d'un champ électrique. Le courant entraîne les molécules et les mailles du gel les freinent. Leur migration dépend donc à la fois de leur taille mais aussi de la concentration du gel; elles iront d'autant plus loin qu'elles sont de petite taille et le gel moins concentré. Cette technique peut être utilisée pour séparer de l'[[Acide désoxyribonucléique|ADN]], de l'[[Acide ribonucléique|ARN]] ([[gels d'agarose]] ou d'[[acrylamide]]) ou des protéines (gel d'acrylamide).
* Électrophorèse sur gel en gradient dénaturant : [[Denaturing Gradient Gel Electrophoresis]](DGGE).
* [[Électrophorèse capillaire]] : Variante d'électrophorèse utilisée pour le séquençage de l'ADN.
==Manipulation d'ADN et d'ARN==
* [[Extraction d'ADN]]
* Digestion enzymatique (''restriction digest'') : technique utilisant des [[enzyme de restriction|enzymes de restriction]] pour couper spécifiquement une molécule d'ADN afin de la manipuler ou de la cloner.
* [[Minipréparation]] ou miniprep : technique permettant d'extraire de [[bactérie|bactéries]] transformées une petite quantité d'[[Acide désoxyribonucléique|ADN]] [[plasmide|plasmidique]].
En fonction de la quantité d'ADN souhaitée des minipréparations ou des maxipréparations sont également utilisées.
* [[Clonage]] : technique qui consiste à isoler un fragment d'ADN et à le multiplier à l'identique en l'« insérant » dans une molécule d'ADN « porteuse » appelée vecteur permettant son amplification.
* [[Mutagenèse dirigée]] : techniques qui permettent de modifier de façon précise et ponctuelle des bases d'un génome.
===Amplification===
* [[Réaction de polymérisation en chaine]] : Polymerase chain Reaction (PCR). Cette technique est utilisée pour amplifier de l'ADN, c’est-à-dire obtenir une grande quantité de copies d'une séquence nucléotidique donnée.
*La RT-PCR peut avoir deux sens distincts :
**[[PCR en temps réel]] : Real time PCR.
**[[Transcription inverse]] : reverse transcriptase PCR. Cette technique est dérivée de la [[Polymerase Chain Reaction|PCR]] et permettant de cloner un [[gène]] ou de quantifier son taux de transcription (quantité d'[[Acide ribonucléique|ARN]] présente).
* [[Amplification aléatoire du polymorphisme de l'ADN]] : Random amplification of polymorphic DNA (RAPD). Technique d'amplification aléatoire permettant de comparer des ADN génomiques.
===Séquençage===
* [[Séquençage de l'ADN]] : technique permettant de définir l'ordre des nucléotides d'un fragment d'ADN [[plasmide|plasmidique]] ou génomique.
Les différentes méthodes de séquençage :
:*Méthode chimique ou méthode de Maxam et Gilbert;
:*Méthode enzymatique ou méthode de Sanger.
===Quantification===
* [[Southern_blot|Southern blotting]] : technique utilisant l'[[électrophorèse sur gel]] et permettant de détecter des séquences d'ADN particulières. Utilisée fréquemment en [[biologie moléculaire]] pour détecter le nombre de copies de [[transgène]]s insérées dans le [[génome]] d'une cellule ou d'un organisme génétiquement modifié.
* [[Northern_blot|Northern blotting]] : technique dérivée du [[Southern_blot|Southern blotting]] utilisée pour détecter et quantifier un type d'ARN donné.
===Autres===
* Le [[marquage des acides nucléiques]].
* [[Transformation (génétique)|Transformation génétique]] ou [[transgénèse]] : technique consistant à introduire un ou plusieurs [[gènes]] dans des [[Cellule (biologie)|cellules]] (par exemple végétales, animales, bactériennes) menant à la transmission du [[gène]] introduit, ou [[transgène]], aux générations successives.
* Le [[polymorphisme de longueur des fragments de restriction]] (ou RFLP) : technique d'étude du polymorphisme génétique, à la base des "empreintes génétiques" et du "ribotypage".
* L'[[hybridation fluorescente in-situ]] (en anglais ''Fluorescent in situ hybridization'' ou FISH)
==Manipulation de protéines==
* [[Western_blot|Western blotting]] : technique dérivée du [[Southern_blot|Southern blotting]] utilisée pour détecter et quantifier un type de protéine donné.
*[[Séquençage des protéines]] : technique permettant de définir l'ordre des acides aminés d'une séquence polypeptidique.
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[[Catégorie:Biologie moléculaire]]
[[Catégorie:Réaction en chaîne par polymérase]]
[[Catégorie:Technique de biologie moléculaire|*]]